HPLC儀器的量程范圍及其測(cè)試方法-華普通用
穩(wěn)定性(基線漂移和重復(fù)性)測(cè)試方法：
這里包括儀器的靜態(tài)基線漂移和動(dòng)態(tài)基線漂移的測(cè)試方法：
一般來(lái)說(shuō)，使用者不關(guān)心單個(gè)檢測(cè)器的靜態(tài)指標(biāo)，所以，可以不專門測(cè)試檢測(cè)器的靜態(tài)基線漂移。但是，作者認(rèn)為設(shè)計(jì)、制造者應(yīng)該測(cè)試靜態(tài)基線漂移這個(gè)指標(biāo)，測(cè)試方法與測(cè)試整機(jī)(系統(tǒng))的動(dòng)態(tài)基線漂移完全相同。
動(dòng)態(tài)基線漂移測(cè)試方法如下：冷態(tài)開(kāi)機(jī)，預(yù)熱2小時(shí)，連續(xù)測(cè)試1小時(shí)。1小時(shí)內(nèi)的最大最小值之差就是動(dòng)態(tài)漂移。(也有測(cè)試更長(zhǎng)時(shí)間的，例如作者在FLD檢測(cè)器研發(fā)時(shí)，為了考察儀器的長(zhǎng)時(shí)間漂移，連續(xù)測(cè)試48小時(shí)，儀器的漂移小于5mV)。
重復(fù)性及其測(cè)試方法：與漂移測(cè)試方法相同，對(duì)儀器進(jìn)行多次測(cè)試(作者認(rèn)為一般是5-7次)，其數(shù)據(jù)的符合程度就是重復(fù)性，一般用RSD表示。
量程范圍及其測(cè)試方法
1)定義
儀器能適用測(cè)量的范圍或儀器能滿足測(cè)量要求的范圍叫量程范圍。其表示方法為AUFS(Absorbance Unit Full Scale)或AU/FS(Absorbance Unit/Full Scale)。80年代以前，也有很多人用OD(光密度)這個(gè)概念表示Abs(Absorbance)，即用ODFS來(lái)表示UVD的量程，但是OD不符合光對(duì)物質(zhì)吸收的物理概念，不符合儀器學(xué)理論，所以，目前國(guó)際上已經(jīng)廢除“OD”概念，不能再使用“ODFS”了。
在實(shí)際的日常分析工作中，也有化學(xué)工作者用具體的化學(xué)物質(zhì)來(lái)描述HPLC的量程。但是不同物質(zhì)，由于摩爾吸光系數(shù)不同，表現(xiàn)出的靈敏度也不同，所以作者認(rèn)為用具體的化學(xué)物質(zhì)來(lái)描述HPLC儀器的量程不符合儀器學(xué)理論的要求。作者認(rèn)為，給出AUFS最合適，其最大優(yōu)點(diǎn)是這種表示方法與樣品的性質(zhì)無(wú)關(guān)，便于比較同一類型檢測(cè)器的性能優(yōu)劣。但是這種表示方法對(duì)使用者來(lái)說(shuō)不大直觀、不大方便。目前，國(guó)際上的HPLC儀器的量程范圍一般為：0.005-2.5AUFS(例如Waters的HPLC)。少數(shù)優(yōu)質(zhì)儀器的下限為0.001AUFS,但是有些儀器給出0.001-3.0AUFS的量程是有水分的，因?yàn)閁VD的雜散光一般都比較大，而雜散光是光吸收類分析儀器主要分析誤差的來(lái)源，它主要限制被分析樣品濃度(吸光度)的上限。所以，HPLC的UVD給出0.001-3.0AUFS的量程一般是不準(zhǔn)確的。
目前，國(guó)內(nèi)外很多HPLC儀器的UVD生產(chǎn)廠商不給儀器的量程，這是不妥的。因?yàn)?，不給量程范圍就意味著不知道檢測(cè)器的靈敏度(下限)，不知道多少吸光度時(shí)儀器能達(dá)到滿度。當(dāng)然，目前有很多HPLC儀器的UVD生產(chǎn)廠商，給出了儀器對(duì)某一物質(zhì)的最小檢測(cè)濃度或最小檢測(cè)量，這在某種程度上也可以反映儀器的靈敏度，并且對(duì)使用者來(lái)說(shuō)，比較方便、比較直觀。但是，這種表示方法只是對(duì)某一物質(zhì)而言，特別是會(huì)帶來(lái)樣品處理產(chǎn)生的誤差、容易低估儀器噪聲的影響，因此，從儀器學(xué)理論的角度來(lái)看是不科學(xué)的。
2)量程范圍測(cè)試方法
目前，國(guó)際上對(duì)HPLC的UVD的量程范圍設(shè)計(jì)指標(biāo)，一般在0.005-3.0AUFS內(nèi)。作者在研制HPLC的UVD檢測(cè)器時(shí)，用原上海大華儀表廠生產(chǎn)的XWT-204記錄儀的1V檔測(cè)試。當(dāng)對(duì)數(shù)放大器的差分放大器的總輸出為1V時(shí)，記錄儀滿度(100格)。當(dāng)儀器的有效光電信號(hào)從0.005-3.0V時(shí)，均可保證對(duì)數(shù)放大器的輸出為1V;此時(shí)，這個(gè)0.005-3.0V對(duì)應(yīng)的吸光度為0.005-3.0Abs。要求從0.005-3.0Abs時(shí)，光度準(zhǔn)確度都能保證在1%以內(nèi)(即1V±10mv)。如此測(cè)量3次并取均值，即是HPLC的量程范圍(0.005-3.AUFS)。
目前，國(guó)內(nèi)外許多制造商都用萘或者蒽來(lái)測(cè)試HPLC系統(tǒng)的靈敏度，這種做法也可以，但是從儀器學(xué)理論角度考量，作者認(rèn)為不科學(xué)。因?yàn)椋孩佟⒉荒芙o出儀器的測(cè)量范圍，只能給出萘的最小檢測(cè)濃度;②、試樣的配制會(huì)帶來(lái)很多誤差;③、這種方法所作的測(cè)試，實(shí)際上是計(jì)算出來(lái)的靈敏度，而不是測(cè)試出來(lái)的真正的靈敏度，不能反應(yīng)儀器真正的靈敏度。如果實(shí)際測(cè)試，肯定比計(jì)算的數(shù)據(jù)大很多。④、不與國(guó)際接軌，不便比較不同儀器的性能。雖說(shuō)近幾年國(guó)內(nèi)外采用此方法的科技工作者比過(guò)去多，但是不能掩蓋方法的局限性。所以，最好的方法還是給出儀器的測(cè)量范圍。
還有人用靜態(tài)噪聲的2倍或3倍來(lái)計(jì)算最小檢測(cè)濃度，這樣計(jì)算出來(lái)的結(jié)果，同樣是不真實(shí)的。因?yàn)閺膬x器學(xué)理論角度來(lái)看，一般在正常情況下，最小檢測(cè)濃度是在系統(tǒng)處在動(dòng)態(tài)的情況下測(cè)試的，所以計(jì)算最小檢測(cè)濃度就必須用動(dòng)態(tài)噪聲，而不能用靜態(tài)噪聲。
還有人測(cè)試HPLC的最小檢測(cè)濃度時(shí)，采用一些計(jì)算公式(如：Cmin=2NC/H×20，式中：Cmin 為最小檢測(cè)濃度，N為儀器的噪聲;C為濃度，H為峰高)，計(jì)算時(shí)不考慮移動(dòng)相的流速，這是不妥的。不考慮移動(dòng)相的流速或計(jì)算公式中去掉移動(dòng)相的流速，就意味著是靜態(tài)的最小檢測(cè)濃度，而使用者需要的是系統(tǒng)的動(dòng)態(tài)最小檢測(cè)濃度。所以作者認(rèn)為這種計(jì)算方法很不合理，對(duì)使用者來(lái)講是沒(méi)有意義的，這種計(jì)算方法不可采用。